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ELISA試劑盒

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大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒

大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒
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型號:大鼠MIP-3β

采購度:175    原產地:美洲

發(fā)布時間:2012/2/27 18:02:01

產品簡介:上海恒遠生物專業(yè)代理進口“大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒”,公司一直秉承對客戶負責,以高質量,超優(yōu)惠的價格贏得廣大老師和同學們的信任與支持。

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詳細信息

大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒 大鼠MIP-3β  大鼠elisa試劑盒

產品名稱:大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒     

各種種屬:人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標本齊全:血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液、關節(jié)液、胸腔溢液等…
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務.

試劑:
(1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2)  洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M   
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克   KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
(4) 終止液(2M H2SO4):   
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。   
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg   
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl
(8) 抗原、抗體和酶標記抗體。
(9) 正常人血清和陽性對照血清。

注意事項:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以實驗結果的性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。   
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的*適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值而蛋白量*少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
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